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PCR 進行的基本條件是什么
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PCR 進行的基本條件是什么

可圈可點用戶
2021-03-28 13:23
優質解答

答案

PCR反應進行的條件:引物(PCR引物為DNA片段,細胞內DNA復制的引物為一段RNA鏈)、酶、dNTP、模板和緩沖液(其中需要Mg2+)。

解析

引物有多種設計方法,由PCR在實驗中的目的決定,但基本原則相同。PCR所用的酶主要有兩種來源:Taq和Pfu,分別來自兩種不同的噬熱菌。其中Taq擴增效率高但易發生錯配。Pfu擴增效率弱但有糾錯功能。所以實際使用時根據需要必須做不同的選擇。

知識點

PCR的特點:

1、靈敏度高

PCR產物的生成量是以指數方式增加的,能將皮克(pg=10-12)量級的起始待測模板擴增到微克(μg=-6)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中最小檢出率為3個細菌。

2、簡便、快速

PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。

3、純度要求低

不需要分離病毒或細菌及培養細胞,DNA 粗制品及RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發、細胞、活組織等DNA擴增檢測。

可圈可點用戶
2021-03-28 18:23
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